Материал добавлен пользователем drli
Данная информация предназначена для специалистов в области здравоохранения и фармацевтики. Пациенты не должны использовать эту информацию в качестве медицинских советов или рекомендаций.
Динамические изменения кислородзависимой функции нейтрофилов
при моделированном спаечном процессе брюшины
В.А.Липатов, М.С.Гомон, А.Л.Локтионов, А.В.Беседин, И.Л.Локтионова
Курский государственный медицинский университет
Кафедра оперативной хирургии и топографической анатомии
Кафедра анатомии человека
Кафедра биохимии
Кафедра микробиологии
По поводу спаечной болезни брюшины (СББ) ежегодно в хирургических отделениях
лечится 1% прооперированных ранее больных, кишечная непроходимость развивается у
50-75% пациентов со СББ, ее консервативное лечение малоэффективно. После
операций по поводу спаек брюшной полости рецидивы заболевания составляют 32–71%,
летальность при спаечной кишечной непроходимости колеблется в пределах 13–55%,
надежные средства профилактики послеоперационного спаечного процесса брюшной
полости (СПБП) до настоящего времени находятся на стадии разработки [2, 4, 7,
11, 12].
Большинство авторов едины во мнении, что основным этиопатогенетическим фактором
заболевания является повреждение мезотелия брюшины и воспаление с преобладанием
его пролиферативной фазы [1, 8, 13].
Многие хирургические заболевания сопровождаются выраженными изменениями в
иммунной системе, характеризующимися как состояние вторичного иммунодефицита.
Этому способствует комплекс патологических факторов основного заболевания,
стресс, обезболивание, операционная травма [6]. Исследование иммунного статуса и
попытки его коррекции у больных хирургического профиля показали, что применение
иммуномодуляторов в комплексе современных методов лечения способствует
ликвидации послеоперационных осложнений, ускоряет заживление тканей, уменьшает
время реабилитации больных после операции [9].
Ведущую роль в индукции воспаления играют полиморфно-ядерные лейкоциты. Они
мигрируют из кровотока в ткани и выполняют свои защитные функции. Продукты
стимулированных нейтрофилов влияют на активность макрофагов, лимфоцитов,
тромбоцитов; вызывают дегрануляцию тучных клеток; активируют системы
комплемента, свертывания крови, фибринолиза в зоне травматического повреждения
брюшины [3, 10]. В современной литературе нет однозначных данных о состоянии
иммунитета и факторов неспецифической резистентности при СББ.
Исходя из этого, целью нашего исследования явилось изучение динамических
изменений факторов неспецифической резистентности организма при
экспериментальном СПБП.
Эксперименты проводили на здоровых половозрелых крысах-самцах линии Вистар,
массой 250-300 г, содержащихся на стандартном пищевом и питьевом рационе в
условиях вивария КГМУ. Исследования выполняли с соблюдением принципов,
изложенных в Конвенции по защите позвоночных животных, используемых для
экспериментальных и других целей (г. Страсбург, Франция, 1986).
В стерильных условиях под рометаровым наркозом проводилось моделирование СПБП.
После срединного лапаротомного разреза выполнялось гидравлическое препарирование
брюшины вентральной стенки с последующим ее иссечением на площади 1 х 1 см,
отступя 1 см от края срединной раны. Слепая кишка подвергалась скарификации на
всей поверхности до появления «кровавой росы».
Животные выводились из эксперимента путем передозировки наркоза на 3, 7 и 14
сутки. Оценивались морфологические изменения в брюшной полости с использованием
визуально-описательного метода и оценкой выраженности СПБП методом
семантического дифференциала. Органы, вовлеченные в СПБП изымались из трупов,
фиксировались в 10% растворе нейтрального формалина с последующим изготовлением
парафиновых срезов и их окраской гематоксилин-эозином, пикро-сириус-ред и по
Маллори.
Кислородозависимую активность нейтрофилов определяли по реакции восстановления
нитросинего тетразолия. НСТ-тест основан на поглощении фагоцитами нитросинего
тетразолия из среды и последующим его восстановлением внутри клетки до
диформазана. Реакция с интактными нейтрофилами характеризует степень
«функционального раздражения» этих клеток in vivo (НСТ-тест спонтанный);
показатели НСТ-теста у нейтрофилов, стимулированных in vitro зимозаном,
опсонизированным и неопсонизированным, можно рассматривать как критерий
активности при напряжении их кислородозависимой функций (НСТ-тест
стимулированный н/з и о/з). Индекс стимуляции нейтрофилов на все виды зимозана (КАо,
КАн, КО): отношение диформазан-позитивных клеток в стимулированной реакции к
диформазан-позитивным клеткам в спонтанной реакции НСТ-теста [5].
Во всех случаях на всех сроках деформированная слепая кишка была фиксирована
плоскостной спайкой к вентральной стенке в месте ее десерозирования. У некоторых
животных в СПБП вовлекались петли кишечника, сальник и другие мобильные органы
брюшной полости. Выраженность СПБП на 3 сутки составила 2,35±0,22 балла, на 7
сутки произошло незначительное, но статистически достоверное уменьшение его
выраженности (p<0,05) до 2,09±0,14 баллов. К 14 суткам выраженность
спайкообразования также имела тенденцию к снижению (1,87±0,16 баллов), однако,
это не носило статистически достоверного характера. При гистологическом
исследовании выявлены динамические изменения созревающей волокнистой
соединительной ткани с явлениями затухания инфильтративных процессов и
прогрессирующим неоангиогенезом.
На 3-и сутки после воспроизведения СПБП наблюдалось снижение спонтанного
НСТ-теста, что косвенно свидетельствовало о присутствии в периферическом русле
небольшого абсолютного количества клеток, которое обусловлено массивной их
миграцией в очаг воспаления. К 7-м суткам наблюдалось стихание воспалительного
процесса, соответственно снижение миграции нейтрофилов. Кроме того, в результате
компенсаторной мобилизации костного мозга, в периферическом русле повышается
количество полиморфноядерных лейкоцитов, в связи, с чем наблюдалось повышение
кислородозависимой активности в спонтанном НСТ-тесте, нормализация которого
происходло к 14 дню после моделирования СПБП.
В стимулированном НСТ-тесте неопсонизированным зимозаном на 3-и сутки после
операции наблюдалось его снижение. К 7 дню эксперимента – он не отличался от
показателей здоровых животных, а к 14 суткам, вновь снижался. Несмотря на такую
динамику, обращает на себя внимание тот факт, что на 7 и 14 сутки резерв
клеточной активности (КАн) в ответ на неопсонизированный зимозан прогрессирующе
снижался. Это объясняется наличием в крови юных, функционально незрелых
полиморфноядерных лейкоцитов, не способных адекватно отвечать на стимуляцию.
Формальное исследование НСТ-теста стимулированного опсонизированным зимозаном
показало его снижение на 3, 7 и 14 сутки после моделирования СПБП, но при
анализе резерва клеточной активности на опсонизированный зимозан (КАо),
оказалось, что изменения были такими же как и при стимуляции неопсонизированным
зимозаном.
Дискретная способность клеток отвечать на различные стимулы (КО) изменялась
закономерно: 3-и сутки после моделирования – не изменялась, так как в
кровеносном русле присутствовали зрелые нейтрофилы, к 7 дню эксперимента
отмечался выраженный «провал», что обусловлено наличием незрелых лейкоцитов, а к
14 суткам – вновь стабилизировалась.
Достоверной корреляционной зависимости между выраженностью СПБП и изменениями
показателей кислород зависимой функции нами не выявлено.
Таким образом, на третьи сутки после моделирования СПБП в периферической крови
отмечается выраженное снижение кислородозависимой активности нейтрофилов, за
исключением коэффициентов активации, которые повышались или были такими же как и
у здоровых животных, что вероятно, связано с массивной миграцией клеток в очаг
воспаления, присутствием в кровеносном русле зрелых нейтрофилов, повышением
резерва клеточной активности. К седьмым суткам наблюдается истощение резерва
кислородозависимой клеточной активности, что обусловлено компенсаторной
активацией костного мозга и появлением в крови юных, функционально незрелых
нейтрофилов. На четырнадцатые сутки происходит частичная нормализация
кислородозависимой активности полиморфноядерных лейкоцитов, что связано со
стиханием воспалительных процессов в брюшной полости.
Следовательно, при СПБП на разных сроках после его моделирования отмечаются
динамические изменения показателей иммунологической реактивности, в частности
кислород зависимой функции нейтрофилов. В связи с этим, перспективным
направлением при разработке антиадгезивных профилактических средств можно
считать использование местной и резорбтивной иммунокоррегирующей терапии, а
также углубленное изучение закономерностей иммунопатогенеза СББ.
Список литературы.
1. Анцупова, В.С. Новые подходы к диагностике и профилактике спаечного процесса
[Текст] / В.С. Анцупова, И.А. Шманева, О.В. Колчева // Материалы IV
Всероссийской университетской научно – практической конференции молодых ученых
по медицине 12-13 мая 2005 г. - Тула, 2005. - С. 218-219.
2. Воробьев, А.А. Профилактика спаечной болезни брюшной полости / А.А. Воробьев,
А.Г. Бебуришвили, Е.Е. Писарева // Хирургия. – 1998. – N 2. – С. 65-86.
3. Долгушин, И.И. Роль нейтрофилов в регуляции иммунной реактивности и
репаративных реакций поврежденной ткани / И.И. Долгушин, А.В. Зурочка, А.В.
Чукичев // Вестн. Рос. Ак. наук. – 2000. - №2. – С. 14-19.
4. Женчевский, Р.А. Спаечная болезнь / Р.А. Женчевский. – М.: Медицина, 1989. –
186 с.
5. Зинкин, В. Ю., Годков М. А. Способ количественной оценки кислородзависимого
метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека. // Клиническая лабораторная
диагностика, -№1, 2004, -С. 26.
6. Конопля, А.И., Кирсанова Е.В., Нестеренко С.Н., Сумин С.А. Влияние препарата
«берлитион®300ед» на отдельные показатели цитокинового статуса в эксперименте in
vitro / Современные проблемы науки и образования, -№ 2, 2005, -С. 53-55.
7. Кургузов, О.П. Профилактика спаечной болезни / О.П. Кургузов, Н.А. Кузнецов,
Е.Г. Артюхина // Хирургия. – 1990. – N 10. – С. 153-159.
8. Осипов, В.И. Патогенетическое лечение и профилактика спаечной болезни органов
брюшной полости: Автореф. дис... д–ра мед. наук / В.И. Осипов. – Саратов, 1994.
– 19 с.
9. Парахонский, А.П. Иммунный дисбаланс при опухолевых заболеваниях и его
коррекция. Материалы Международного конгресса «Иммунитет и болезни: от теории к
терапии», 2005, -С. 251-258.
10. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы [Текст] / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин.
– СПб.: Наука, 2000. – 231 с.
11. Филенко, Б.П. Возможности профилактики и лечения острой спаечной кишечной
непроходимости: Автореф. дис… д–ра мед. наук / Б.П. Филенко. – М., – 2000. – 298
с.
12. Peritoneal adhesions: etiology, pathophysiology, and clinical significance//
Digestive Surgery. – 2001. - №18. – Р. 260-273.
13. Thompson, J. Pathogenesis and prevention of adhesion formation / J. Thompson
// Digestive Surgery. – 1998. – Vol. 15, – N 2. – P. 153-157.
---------------------------
В.А.Липатов, М.С.Гомон, А.Л.Локтионов, А.В.Беседин, И.Л.Локтионова. Динамические
изменения кислородзависимой функции нейтрофилов при моделированном спаечном
процессе брюшной полости. / Материалы I Всероссийской конференции молодых
ученых-медиков, организованной Воронежской государственной медицинской академией
и Курским государственным медицинским университетом / под ред. профессора Е.И.
Есауленко и профессора А.И. Лазарева. – Воронеж, 2007. Т. 2 –С. 207-212.
Источник: http://drli.ds8.ru