Диагностика вирусных инфекций в практике гинеколога

Забор и вид материала. Методы идентификации вирусов в практике гинеколога.

Забор и вид материала.

1. Время забора: забор материала проводить в остром периоде инфекции, а в случае серологических исследований после 2-4 нед. (с целью выявления динамики изменений концентрации антител). 

2. Вид, метод забора и транспортировки материала: зависит от клинической формы инфекции, этиологического фактора и использованного диагностического метода. 

Методы идентификации вирусов. 

1. Электронная микроскопия: позволяет непосредственно выявлять частицы вируса во взятом материале (напр.,кал); модификацией метода исследования, которая увеличивает его чувствительность, является иммуномикроскопия. Доступна только в ограниченном количестве лабораторий и в специализированных центрах. Забор и транспортировка материала → см. ниже. 

2. Культивирование: позволяет увеличить количество и подтвердить присутствие вирусов во взятом образце (мазки берут на транспортную систему со средой для культивации клеток [раствор Хэнкса] или 0,9% NaCl, жидкость из пузырьков на коже - в закрытом капилляре, образцы тканей, соскобы - в сухих пробирках, спинномозговую жидкость, смывы, полученные с использованием раствора Хэнкса, кал, цельная кровь, взятая с гепарином, моча). Вирус размножают в соответствующих клеточных (тканевых) культурах или в куриных эмбрионах (напр., вирус гриппа), а затем идентифицируют на основе цитопатического эффекта или с использованием специфических антител или молекулярными методами. Забор материала осуществляйте в чистый, стерильный резервуар без консервантов, который плотно закрывается. Использование транспортных сред для культивации бактерий может сделать невозможным выделение вирусов. Образцы тканей поместите в небольшом количестве 0,9% NaCl или раствора Хэнкса. Пересылайте материал в лабораторию при темп. 2-4°C; перед культивацией материал можно хранить <12-24 ч при темп. 4°C. Если нет возможности транспортировать материал в лабораторию в течение 24 ч, в некоторых случаях его можно заморозить и транспортировать в лабораторию в условиях, которые делают невозможным размораживание (согласуйте такую тактику с персоналом лаборатории). 

3. Серологические методы: в клинической практике играют основную роль в вирусологической диагностике. Позволяют выявлять специфические антитела классов IgM и IgG в сыворотке и подтвердить сероконверсию или повышение их уровня. Материал: 

1) сыворотка (1-2 мл) - без гемолиза, сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; до 48 ч от забора храните и перевозите материал в условиях холода (5±3°С); если это невозможно → перешлите как можно быстрее при комнатной темп. (21±4°С). Если образец будет храниться >48 ч → заморозьте его; транспортировать в условиях, которые делают невозможным размораживания; 

2) цельная кровь (5 мл) - сделайте забор «на сгусток» в стерильную пробирку; пробирку нужно транспортировать в лабораторию в течение 2 ч от забора крови; 

3) спинномозговая жидкость (1 мл) - сделайте стерильный забор в плотно закрытую пробирку; правила хранения и транспортировки → как в случае сыворотки (см. выше). Определение специфических антител в спинномозговой жидкости всегда нужно проводить параллельно с их определением в сыворотке, взятой в это же время. 

4. Выявление вирусных антигенов (имунофлюорисцентний метод [IFA], EIA, ELISA, латекс-агглютинация [LAT], RIA): 

1) мазок или смывы из носоглотки (с целью идентификации вирусов дыхательной системы, кори и т.п.) - сделайте забор стерильным тампоном, увлажненным 0,9% NaCl или раствором Хэнкса, далее разместите тампон в плотно закрытой стерильной пробирке с 1-1,5 мл раствора Хэнкса. Кончик тампона не может быть сухим. Материал доставьте в лабораторию сразу после забора. В случае идентификации вирусов дыхательной системы материалом для исследования также могут быть приготовленные и переданные в лабораторию фиксированные ацетоном препараты для микроскопии; 

2) цельная кровь - наберите 6-10 мл в стерильную пробирку с антикоагулянтом и немедленно отправьте в лабораторию; 

3) моча - наберите 10-50 мл в стерильный резервуар и отправьте в лабораторию сразу после забора; 

4) кал → хранение и транспортировки как при культивации; 

5) биоптат тканей - сразу после получения поместите образец ткани в стерильный стекляный резервуар, между тампонами, увлажненными 0,9% NaCl. Доставьте как можно быстрее в лабораторию (<3 ч от забора), до момента транспортировки храните в холодильнике (8-12°С). 

5. Молекулярные методы (выявляют геном вируса или его специфические фрагменты): возьмите материал в стерильные плотно закрытые пробирки или резервуары. Вид материала: 

1) цельная кровь (3 мл) - сделайте забор с антикоагулянтом (лучше ЭДТА, не используйте гепарин, - является неспецифическим ингибитором PCR); если образец будет доставлен в лабораторию в течение 24 ч, то может транспортироваться при комнатной температуре (21±4°C), если позже (до 5 дней), рекомендуется хранение и транспортировка в холодильнике при темп. (5±3°С); 

2) спинномозговая жидкость (1-2 мл) - после забора как можно быстрее доставьте образец в лабораторию, лучше - в холодильнике при темп. (5±3°С). Если его невозможно доставить в лабораторию в течение 24 ч → заморозьте его; транспортировка должна происходить в условиях, которые делают невозможным размораживание; 

3) сыворотка (2-3 мл) - кровь нужно отцентрифугировать как можно быстрее после забора, а сыворотку немедленно отправить в лабораторию (→ спинномозговая жидкость). Если не можете доставить сыворотку сразу после забора → действуйте аналогично, как со спинномозговой жидкостью; 

4) моча сделайте забор с первой струи >2 ч после последнего мочеиспускания (лучше - утром). Образец доставьте в лабораторию так быстро, насколько это возможно (до нескольких часов можно транспортировать при комнатной темп., если дольше → разместите при темп. 5±3°С и доставьте так быстро, как это возможно); 

5) биоптат тканей (≥0,2 г) - выполните забор в стерильные пробирки или в резервуар со стерильным 0,9% NaCl; хранения и транспортировка → как моча. При необходимости пролонгированного хранения → как спинномозговая жидкость; 

6) бронхо-альвеолярные смывы (1-2 мл с БАЛ) - хранение и транспортировка → как сыворотка.