Данная информация предназначена для специалистов в области здравоохранения и фармацевтики. Пациенты не должны использовать эту информацию в качестве медицинских советов или рекомендаций.
ГК Алкор Био разработала под заказ линейку наборов для выявления мутаций в гене CYP21A2, ассоциированных с развитием врожденной дисфункции коры надпочечников
В марте лаборатория молекулярной диагностики Группы компаний Алкор Био завершила разработку линейки наборов для определения мутаций в гене CYP21A2. Мутации в гене CYP21A2, кодирующем фермент 21-гидроксилаза, являются причиной развития одного из наиболее распространенных наследственных заболеваний: врожденной дисфункции коры надпочечников (ВДКН). Более 90% случаев этого заболевания связано с нарушениями функционирования данного фермента.
ГК Алкор Био разработала под заказ линейку наборов для выявления мутаций в
гене CYP21A2, ассоциированных с развитием врожденной дисфункции коры
надпочечников
В марте лаборатория молекулярной диагностики Группы компаний Алкор Био
завершила разработку линейки наборов для определения мутаций в гене CYP21A2.
Мутации в гене CYP21A2, кодирующем фермент 21-гидроксилаза, являются причиной
развития одного из наиболее распространенных наследственных заболеваний:
врожденной дисфункции коры надпочечников (ВДКН). Более 90% случаев этого
заболевания связано с нарушениями функционирования данного фермента.
Заказчиком наборов для выявления мутаций в гене CYP21A2 выступила самарская
компания «Ген-технология» , апробация разработанных в ГК Алкор Био тест-систем
проходила на базе ГБУЗ «Самарский областной центр планирования семьи и
репродукции». После успешного завершения клинических испытаний, компания
«Ген-технология» приступила к использованию новых наборов в диагностических
целях.
Врожденная недостаточность фермента 21-гидроксилазы, как правило, негативно
влияет на репродуктивную функцию, поэтому подобные тесты наиболее востребованы в
медучреждениях, специализирующихся на проблемах бесплодия.
Как отметил руководитель группы ПЦР инфекционных заболеваний лаборатории
молекулярной диагностики ГК Алкор Био Виталий Ведерников:
«Нами разработано пять наборов для определения следующих мутаций в гене
21-гидроксилазы: CYP21A2*8, CYP21A2*9, CYP21A2*10, CYP21A2*17, CYP21A2*19.
Помимо этого мы разработали еще два набора, необходимых на предварительных
этапах анализа – набор для количественной оценки ДНК человека и набор для
предамплификации гена CYP21A2 в присутствии псевдогена. Выявление полиморфизмов
в гене 21-гидроксилазы включает пять этапов: экстракция ДНК из клинического
материала; оценка концентрации ДНК; разведение ДНК до рабочей концентрации;
предамплификация гена CYP21A2 с последующим разведением продуктов ПЦР в 1000
раз; проведение дуплексного анализа для определения полиморфизмов в гене
CYP21A2.
На первом этапе экстракция ДНК может быть проведена с использованием
большинства наборов соответствующего назначения. Для корректной предамплификации
гена CYP21A2 на четвертом этапе требуется количественная оценка ДНК с
последующим ее разведением до рабочих концентраций (второй и третий этап,
соответственно). Однако, второй и третий этапы могут быть исключены в случае
использования для экстракции ДНК из цельной крови набора «Экстра-ДНК-Био»
производства ГК Алкор Био за счет получения на выходе ДНК с концентрацией,
подходящей для реакции предамплификации.
На четвертом этапе проводится предамплификация гена 21-гидроксилазы, это
необходимо в связи с тем, что в геноме человека, помимо гена CYP21A2, также
присутствует его псевдоген на 95% совпадающий с ним по последовательности. Если
не проводить специфическую предамплификацию, то могут появиться
ложно-положительные результаты связанные с обнаружением полиморфизмов
встречающихся в псевдогене, но при этом не вызывающих развитие патологии.
Соответственно, нами был разработан набор, позволяющий специфически
амплифицировать только ген CYP21A2 в присутствии псевдогена с учетом даже
рекомбинантных форм.
На пятом этапе анализа – определении мутаций, в качестве ДНК-матрицы
используются ампликоны, полученные в результате предамплификации гена. Для
анализа полиморфизмов, нами в наборах был использован подход на основе плавления
дуплексов, позволяющий с высокой надежностью определять искомые мутации.
В дальнейшем планируется расширить перечень определяемых полиморфизмов в гене
CYP21A2».
При создании новых наборов разработчики ГК Алкор Био использовали реагенты
собственного производства: Taq M полимеразу, зонды, праймеры.
Напомним, что о выводе на рынок новой услуги - разработке и производстве
тест-систем на основе ПЦР (полимеразной цепной реакции) для сторонних
организаций - ГК Алкор Био объявила в начале 2015 года. ПЦР тест-системы широко
применяются для выявления и количественного анализа микроорганизмов, для
определения генетических полиморфизмов (изменений в структуре генома) и других
исследований. В такой услуге в первую очередь могут быть заинтересованы
медико-генетические центры, диагностические лаборатории и
научно-исследовательские институты.